消毒与灭菌效果的评价方法与标准

威科检测集团有限公司

**篇压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准
1主题内容与适用范围
本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。
本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。
2试剂
本标准所用试剂，凡未说明规格者，均为分析纯（AR）,水为蒸馋水。
2.1蛋白腺。
2.2葡萄糖。
2-3漠甲酚紫酒精溶液:取漠甲酚紫2. Og,溶于100mL95%乙醇中。
2-4漠甲酚紫蛋白腺水培养基配制：蛋白豚io. 0g,葡萄糖5. 0g,溶于1000mL蒸搐水中，调pH值至 7. 0-7.2,然后再加2%漠甲酚紫酒精溶液0. 6mL,摇匀后，按5mL/管，分装包口，置压力蒸汽灭菌器 中，于115 C灭菌40min后备用。
3指示菌
嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC 7953或SSI K31）菌片，含菌量为5X105~5X106 cfu/片，121 C下，杀灭 90%微生物所需时间D⑵值为1. 3~1. 9min,杀灭时间（KT值）^<19min,存活时间（ST值）为2 3. 9mino
4化学指示剂
需用卫生部批准的化学指示剂O
5技术要求
压力蒸汽灭菌器 压力 ,MPa/cm? 温度，C 灭菌时间，nun
下排气式 0. 070 115 40
0. 105 121 30
预真空式 0. 210 134 4〜6
6检测方法
6-1生物学指标(用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据)。
6-1.1将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。
6-1.2灭菌柜室内，上、中层*和排气口处各放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣,4块小 手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块10cm X 10cm. 8层纱布敷料包裹成25cm X 30cm X 30cm大 小)。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒(22cmX 13cmX6cm)代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示 菌片放于中心部位两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封)，将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。
6-1.3经一个灭菌周期后,在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入漠甲酚紫 葡萄糖蛋白腺水培养基中，56C培养48h,观察培养基颜色变化。
‘&2化学指标
在物品包外用化学指示胶带，可作为物品是否经过灭菌的处理标志。在物品包内中心部位用化学指 示剂，可作为物品是否灭菌的参考标志。
7结果判定及评价
7.1同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的漠甲酚紫蛋白腺水培养基全部不 变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的漠甲酚紫蛋白腺水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌 不合格。
7-2化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时，或熔化时作为灭菌合格的参考标准。
第二篇紫外线表面消毒效果评价方法与标准
8主题内容与适用范围
本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测 方法。
本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。
9指示菌
9. 1 大肠杆菌(8099 或 ATCC 25922)。
9-2枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)。
10物理学指标
10-1在电压22OV时，普通30W直管型紫外线灯，在室温为2O-25-C的使用情况下,253. 7nm紫外线 辐射强度(垂直Im处)应＞70MW/cm2o
10-2在电压220V时，高强度紫外线灯，在室温为2O-25 C的使用情况下，253. 7nm紫外线辐射强度 (垂直 Im 处)应＞200^W/cmzo
10.3照射剂量按式(1)计算：
剂量(MW • s/cm2) =强度(fzW/cm2)X 时间(s) ( 1 )
11检测方法
11.1物理学检测方法
11-1.1灯管的紫外线强度(MW/cm2)用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪(标定有效期内)， 在灯管垂直位置Im处测定。
11.1.2在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对象的实际距离测定。
11.1.3表面消毒接受的照射剂量,应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到20 000 MW • s/cm2,对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到100 000/zW • s/cm2.
11.2生物学检测方法
11-2.1采用载体定量消毒试验。载体制备按本标准附录C进行。
11.2.2开启紫外线灯5min后，将8个染菌玻片平放于灭菌器皿中，水平放于适当距离照射，于4个不 同间隔时间各取出2个染菌玻片，分别投入2个盛有5mL洗脱液（1%吐温80,1%蛋白脸生理盐水）试 管中，振打80次。
11. 2-3经适当稀释后，取0. 5mL洗脱液，作平板倾注，每个染菌玻片接种两个，放37C培养48h作活 菌计数。
11. 2. 4阳性对照，除不作照射处理外，取2个染菌玻片分别投入2个盛有5mL洗脱液中振打80次, 余按4. 2. 3进行。
11-2.5计算杀灭率
F "八=阳性对照回收菌数一试验组回收菌数 亦大毕'阳性对照回收菌数
12判定标准
12-1对指示菌杀灭率299.9%判为消毒合格。
12-2达物理学检测标准时，作为消毒合格的参考标准。