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无菌操作技术及注意事项
1、玻璃器皿的消毒和清洁
⑴新购玻璃器皿的处理
新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷,流水冲洗,再用1%~2%盐酸溶液浸泡,以除去游离碱,再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等,经清水洗净后应注入浓盐酸少许,慢慢转动,使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸,再用水冲洗。
⑵污染玻璃器皿的处理
①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡,再煮沸30分钟,或在3%~5%漂白粉澄清液内4小时,有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫,然后用清水冲洗至无肥皂为止。较后用少量蒸馏水冲洗。
②细菌培养用的试管和培养皿可**集中,用1kg/cm2高压灭菌15~30分钟,再用热水洗涤后,用肥皂洗刷,流水冲洗。
③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时,逐支用流水反复冲洗,再用蒸馏水冲洗。
④油蜡沾污的器皿,应单独灭菌洗涤,先将沾有油污的物质弃去,倒置于吸水纸上,100℃烘干半小时,再用碱水煮沸,肥皂洗涤,流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。
⑤染料沾污的器皿,可先用水冲洗,后用清洁或稀盐酸洗脱染料,再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性,所以不宜用肥皂的碱水洗涤。
⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水冲洗,再用肥皂或弱碱性煮沸,自然冷却后,流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片,可置于清洁液内浸泡后再冲洗。
常用清洁液的配制法
⑴重铬酸钾清洁液:可根据不同需要,选用下列的任何一种浓度。先将重铬酸钾溶于水中,再慢慢加入浓硫酸。注意,此时可产生高热,应防止容器破裂。重铬酸钾清洁液除污力强,腐蚀性大,应避免接触皮肤和衣服。为防止吸收空气的水分而变质,此液应贮存于带盖的容器中。如清洁效力较差,可再加入少量重铬酸钾及浓硫酸,还可继续使用。直到液体变蓝绿色,即不能再用。配制重铬酸钾清洁液时,宜用耐高温的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿时,应特别注意防止产生高热而破裂,切忌用量筒来配制。
⑵磷酸三钠将其配成5%~10%水溶液,可用于洗涤玻璃器皿上的油污,但经常使用腐蚀玻璃,使器皿表面模糊、毛糙。
⑶硝酸清洁液将其配成50%水溶液,可用于清洁微量滴定筒。⑷乙二胺四乙酸二钠(EDTA钠盐)将其配成5%~10%水溶液,可洗脱粘附于玻璃器皿内壁的白色沉淀物。⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白质的良好溶剂,适用于洗涤粘附有血液血清等蛋白质的吸管、试管等。